Како да се одреди оптималната концентрација?
За индукторот IPTG (изопропил-бета-d-тиогалактозид), колку е поголема концентрацијата, толку подобро.Оптималната концентрација зависи од специфичните експериментални услови и саканиот индукциски ефект.
Општо земено, концентрацијата на IPTG се користи во опсег од 0,1-1 mM.Пониските концентрации може да ги намалат негативните ефекти врз клеточниот раст и може да ја намалат цитотоксичноста поради прекумерна експресија на целните протеини.Повисоките концентрации може да предизвикаат прекумерно клеточно метаболичко оптоварување, што влијае на клеточниот раст и ефикасноста на експресијата.
Начинот на одредување на оптималната концентрација може да биде да се оцени нивото на изразување на целниот протеин со спроведување на тестови за индукција на IPTG во различни концентрации.Тестовите за култура во мали размери може да се изведат со користење на опсег на концентрации на IPTG (на пр. 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM, итн.) и ефектот на изразување во различни концентрации може да се оцени со откривање на нивото на изразување на целниот протеин (на пр. Western откривање на размачкана или флуоресценција).Според експерименталните резултати, концентрацијата со најдобар изразен ефект е избрана како оптимална концентрација.
Дополнително, може да се повикате и на релевантната литература или на искуството од други лаборатории за да го разберете вообичаено користениот опсег на концентрација на IPTG под слични експериментални услови, а потоа да го оптимизирате и прилагодите според експерименталните потреби.
Важно е да се напомене дека оптималната концентрација може да варира во зависност од различните системи на изразување, целните протеини и експерименталните услови, па затоа е најдобро да се оптимизира од случај до случај.
Време на објавување: 28-ти септември 2023 година