Околу нас има многу неопеани херои, кои навидум се обични, а всушност молчејќи ни придонесуваат многу.Протеиназата К е „неопеаниот херој“ во индустријата за молекуларна дијагностика, иако во споредба со „големата и моќната“ во индустријата, протеиназата К е толку ниска што долго време ја занемарувавме нејзината важност.Со избивањето на новата епидемија на круната, побарувачката за протеиназа К е зголемена, а понудата дома и во странство е далеку зад потрошувачката, а сите одеднаш сфатија дека протеиназата К е толку важна.
Која е употребата на протеиназа К?
Протеиназата К е серин протеаза со протеолитичка ензимска активност и може да одржува активност во широк опсег на средини (pH (4-12,5), пуфер со висока содржина на сол, висока температура од 70°C итн.).Покрај тоа, активноста на протеиназата К не е инхибирана од SDS, уреа, EDTA, гванидин хидрохлорид, гванидин изотиоцијанат итн., а одредена количина на детергент исто така може да ја подобри активноста на протеиназата К. Во медицински третман (вирусна и микробна дезинфекција ), храна (омекнување на месото), кожа (омекнување на косата), производство на вино (прочистување на алкохол), подготовка на аминокиселини (разградени пердуви), екстракција на нуклеинска киселина, хибридизација на самото место итн., протеиназа K Постојат апликации.Најчесто користена апликација е екстракција на нуклеинска киселина.
Протеиназата К може да ги ензимолизира сите видови протеини во примерокот, вклучувајќи ги и оние хистони кои се цврсто врзани за нуклеинските киселини, така што нуклеинските киселини може да се ослободат од примерокот и да се испуштат во екстрактот, олеснувајќи го следниот чекор на екстракција и прочистување.При откривање на вирусна нуклеинска киселина, протеиназата К е една од важните компоненти во растворот за земање примероци од вирусот.Протеиназата К може да пукне и да го деактивира обвивниот протеин на вирусот, што е побезбедно во фазата на транспорт и откривање;Покрај тоа, протеиназата К исто така може да ја разградува RNase го спречува разградувањето на вирусната РНК и го олеснува откривањето на нуклеинската киселина.
Преноќната слава на протеиназата К
Без разлика дали во областа на научните истражувања или во областа на IVD, екстракцијата на нуклеинска киселина е најосновниот експеримент, така што протеиназата К отсекогаш била многу важно постоење.Меѓутоа, во минатото, протеиназата К била многу помалку позната од нејзината улога.Голем дел од ова беше поради тоа што односот на понудата и побарувачката на протеиназата К беше многу стабилен.Малкумина би помислиле дека снабдувањето со протеиназа К би било проблем.
Со избувнувањето на новата епидемија на круната, побарувачката за тестирање на нуклеинска киселина се зголеми.До крајот на јуни 2020 година, Кина има завршено скоро 90 милиони нови тестови за круна, а оваа бројка е уште поалармантна на глобално ниво.Во експериментите со екстракција на нуклеинска киселина, работната концентрација на протеиназата К е околу 50-200 μg/mL.Општо земено, потребни се околу 100 μg протеиназа К за да се извлече примерок од нуклеинска киселина.Во вистинска употреба, со цел да се зголеми ефикасноста на екстракција на нуклеинска киселина, често Протеиназата К ќе се користи во зголемена количина.Откривањето на нуклеинската киселина на новиот коронавирус донесе голема количина на побарувачка на протеиназа К.Оригиналната рамнотежа на понудата и побарувачката на протеиназа К беше брзо скршена, а протеиназата К стана важен материјал за превенција на епидемијата преку ноќ.
Тешкотии во производството на протеиназа К
Иако со развојот на епидемијата, важната вредност на протеиназата К е вреднувана од луѓето, непријатно е што поради прекумерното ниско ниво на протеиназа К, неколку домашни компании биле вклучени во производството на протеиназа К. Кога луѓето сакаат да воспостават производство на протеиназа К Во текот на производниот процес, откриено е дека протеиназата К е исклучително посебен протеин.Исклучително е предизвик да се прошири производствениот капацитет на протеиназа К за краток временски период.
Големото производство на протеиназа К се соочува со следните тешкотии
1. Низок израз
Протеиназата К може неспецифично да ги деградира повеќето протеини и да предизвика сериозна токсичност на изразената клетка домаќин.Затоа, нивото на изразување на протеиназата К е генерално многу ниско.Скринингот на експресивни системи и соеви кои високо изразуваат протеиназа К генерално бара подолг циклус.
2. Остатоци од пигменти и нуклеински киселини
Големата ферментација внесува големо количество на остатоци од пигмент и нуклеинска киселина домаќин.Тешко е да се отстранат овие нечистотии со едноставен процес на прочистување, а сложеното прочистување ја зголемува цената и ја намалува стапката на обновување.
3. Нестабилност
Протеиназата К не е доволно стабилна, може сама да се ензимолизира и тешко е да се чува стабилно на 37°C долго време без заштитно средство.
4. Лесно се таложи
Кога се подготвува замрзнат прашок од протеиназа К, со цел да се осигура дека цврстата содржина на протеиназа К во замрзнато сушениот прав е голема, неопходно е да се додаде заштитно средство сушено со замрзнување со висока концентрација, но кога концентрацијата на протеиназата К достигнува 20 mg/mL и повеќе, лесно е Агрегирањето формира талог, што носи големи тешкотии при сушењето со замрзнување на протеиназата К со висока содржина на цврсти материи.
5. Голема инвестиција
Протеиназата К има силна протеазна активност и може да хидролизира други протеази во лабораторија.Затоа, протеиназата К бара специјализирани производствени области, опрема и персонал за истражување и развој и производство.
Раствор на протеиназа К на XD BIOCHEM
XD BIOCHEM има зрела платформа за изразување и прочистување на протеини и има богато искуство во изразување и прочистување на рекомбинантните протеини и оптимизација на производните процеси.Преку брзото формирање на тим за истражување и развој, процесот на производство на протеина К од големи размери е надминат.Месечното производство на замрзнато сушен прав е повеќе од 30 KG.Производот има стабилни перформанси, висока ензимска специфична активност и нема остатоци од цитохром и нуклеинска киселина од домаќинот.Добредојдовте да контактирате со XD BIOCHEM Добијте пробен пакет (Е-пошта:sales@xdbiochem.comТел: +86 513 81163739).
Техничките решенија на XD BIOCHEM вклучуваат
Со користење на мулти-копирана плазмидна интеграција, се избираат соеви со висока експресија со ниво на изразување од 8 g/L, со што се надминува проблемот со ниското ниво на изразување на протеиназата К.
Преку воспоставување на повеќестепен процес на прочистување, цитохромот на домаќинот и остатоците од нуклеинската киселина на протеиназата К беа успешно отстранети под стандардната вредност.
Преку високо-пропусен скрининг на заштитни пуфер формулации, беше избран пуфер кој може стабилно да складира протеиназа К на 37°C.
Скрининг пуферите го надминуваат проблемот што протеиназата К лесно се собира и таложи при високи концентрации, и ја поставува основата за сушење со замрзнување со висока содржина на протеиназа К.
XD BIOCHEM протеиназа К примерок
XD BIOCHEM протеиназа K тест за стабилност: нема да има значителна промена во активноста по 80 d на собна температура
Тест за стабилност на XD BIOCHEM proteinase K: нема да има значителна промена во активноста по 80 d на собна температура.
Споредба на ефектот на екстракција на нуклеинска киселина на XD BIOCHEM протеиназа К и конкурентни производи.Во процесот на екстракција на нуклеинска киселина, соодветно се користат XD BIOCHEM и конкурентна протеиназа К.Ефикасноста на екстракција на XD BIOCHEM протеиназата К е повисока, а Ct вредноста на целниот ген е помала.
Време на објавување: 31-12-2021 година