4-Нитрофенил бета-D-галактопиранозид CAS:200422-18-0

Ефект: ONPG е супстрат специјално користен за откривање на присуството и активноста на ензимот β-галактозидаза.Кога ензимот β-галактозидаза е присутен и активен, тој го расцепува ONPG на два производи: о-нитрофенол и дериват на галактоза.Ослободувањето на о-нитрофенол резултира со жолта промена на бојата, која може да се мери со помош на спектрофотометар.

Апликација: ONPG има неколку апликации во молекуларната биологија и биохемиското истражување:

Определување на активноста на β-галактозидаза: ONPG најчесто се користи за мерење и квантифицирање на активноста на ензимот β-галактозидаза.Стапката на формирање на о-нитрофенол, која е директно пропорционална на ензимската активност, може да се мери спектрофотометриски.

Генска експресија и регулација: ONPG често се користи во експерименти поврзани со студии за генска експресија и регулација.Често се користи во анализите на фузија протеини, како што е најчесто користениот систем за фузија lacZ, за проучување на експресијата на гените под контрола на специфични промотори.Активноста на бета-галактозидаза измерена со помош на ONPG дава увид во нивото на генска експресија.

Скрининг за активност на β-галактозидаза: ONPG може да се користи како колориметриски скрининг метод во технологијата за рекомбинантна ДНК за да се идентификува присуството и функционалноста на генот LacZ, кој ја кодира β-галактозидазата.Овој метод на скрининг помага во идентификување на клоновите кои го содржат генот од интерес.

Студии за кинетика на ензими: ONPG е исто така корисен во проучувањето на кинетиката на ензимот β-галактозидаза.Со мерење на брзината на реакцијата ензим-супстрат при различни концентрации на подлогата, можно е да се одредат кинетичките параметри како што се константите Michaelis-Menten (Km) и максималната брзина на реакција (Vmax).