4-нитрофенил бета-D-галактопиранозид CAS:200422-18-0

Ефект: ONPG е супстрат кој специфично се користи за откривање на присуството и активноста на ензимот β-галактозидаза. Кога ензимот β-галактозидаза е присутен и активен, тој го разложува ONPG на два производи: о-нитрофенол и дериват на галактоза. Ослободувањето на о-нитрофенол резултира со промена на жолтата боја, што може да се измери со спектрофотометар.

Примена: ONPG има неколку примени во истражувањата за молекуларна биологија и биохемија:

Одредување на активноста на β-галактозидазата: ONPG најчесто се користи за мерење и квантифицирање на активноста на ензимот β-галактозидаза. Стапката на формирање на о-нитрофенол, која е директно пропорционална на активноста на ензимот, може да се мери спектрофотометриски.

Експресија и регулација на гени: ONPG често се користи во експерименти поврзани со студии за експресија и регулација на гени. Често се користи во тестови за фузиони протеини, како што е вообичаено користениот систем за фузија lacZ, за проучување на експресијата на гени под контрола на специфични промотори. Активноста на бета-галактозидазата мерена со ONPG дава увид во нивото на генска експресија.

Скрининг за активност на β-галактозидаза: ONPG може да се користи како колориметриски метод на скрининг во технологијата на рекомбинантна ДНК за да се идентификува присуството и функционалноста на генот LacZ, кој кодира β-галактозидаза. Овој метод на скрининг помага во идентификување на клонови кои го содржат генот од интерес.

Студии за ензимска кинетика: ONPG е корисен и во проучувањето на кинетиката на ензимот β-галактозидаза. Со мерење на брзината на реакцијата ензим-супстрат при различни концентрации на супстрат, можно е да се утврдат кинетички параметри како што се константите на Михаелис-Ментен (Km) и максималните брзини на реакција (Vmax).